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技術(shù)文章

《食品微生物學檢驗 霉菌和酵母計數(shù)》


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活菌總數(shù);
大腸菌群;
大腸桿菌;
腸道桿菌科;
金黃色葡萄球菌;
綠膿桿菌;
沙門氏菌;
李斯特菌;
腸球菌;
亞硫酸鹽還原梭狀芽孢桿菌;
產(chǎn)氣莢膜梭菌;
霉菌(曲霉屬**、曲霉菌);
酵母菌。 
 

食品**國家標準
《食品微生物學檢驗 霉菌和酵母計數(shù)》
前言
本標準自實施之日起代替 GB/T 4789.15-2003《食品衛(wèi)生微生物學檢驗霉菌和酵母計數(shù)》。
本標準與GB/T 4789.15-2003 相比,主要修改如下:
——修改了范圍;
——修改了檢驗程序和操作步驟;
——修改了培養(yǎng)基和試劑;
——修改了設(shè)備和材料;
——修改了附錄。
本標準的附錄A 為規(guī)范性附錄,附錄B 為資料性附錄。
本標準所代替標準的歷次版本發(fā)布情況為:——GB 4789.15-1984、GB 4789.15-1994、GB/T 4789.15-2003。

食品**國家標準
食品微生物學檢驗 霉菌和酵母計數(shù)
1 范圍
本標準規(guī)定了食品中霉菌和酵母菌(moulds and yeasts)的計數(shù)方法。
本標準適用于各類食品中霉菌和酵母菌的計數(shù)。
2 設(shè)備和材料
除微生物實驗室常規(guī)**及培養(yǎng)設(shè)備外,其他設(shè)備和材料如下:
2.1 冰箱:2 ℃~5 ℃。
2.2 恒溫培養(yǎng)箱: 28 ℃±1 ℃。
2.3 均質(zhì)器。
2.4 恒溫振蕩器。
2.5 顯微鏡:10×~100×。
2.6 電子天平:感量0.1 g。
2.7 無菌錐形瓶:容量500 mL、250 mL。
2.8 無菌廣口瓶:500 mL。
2.9 無菌吸管:1 mL(具0.01 mL 刻度)、10 mL(具0.1 mL 刻度)。
2.10 無菌平皿:直徑90 mm。
2.11 無菌試管: 10 mm×75 mm。
2.12 無菌牛皮紙袋、塑料袋。
3 培養(yǎng)基和試劑
3.1 馬鈴薯-葡萄糖-瓊脂培養(yǎng)基:見附錄A 中A.1。
3.2 孟加拉紅培養(yǎng)基:見附錄A 中A.2。
4 檢驗程序

5 操作步驟
5.1 樣品的稀釋
5.1.1 固體和半固體樣品:稱取25 g 樣品至盛有225 mL **蒸餾水的錐形瓶中,充分振搖,即為1:10稀釋液。或放入盛有225 mL 無菌蒸餾水的均質(zhì)袋中,用拍擊式均質(zhì)器拍打2min,制成1:10 的樣品勻液。
5.1.2 液體樣品:以無菌吸管吸取25 mL 樣品至盛有225 mL 無菌蒸餾水的錐形瓶(可在瓶內(nèi)預置適當數(shù)量的無菌玻璃珠)中,充分混勻,制成1:10 的樣品勻液。
5.1.3 取1 mL 1:10 稀釋液注入含有9 mL 無菌水的試管中, 另換一支1 mL 無菌吸管反復吹吸,此液為1:100 稀釋液。
5.1.4 按5.1.3 操作程序,制備10 倍系列稀釋樣品勻液。每遞增稀釋一次,換用1 次1 mL 無菌吸管。
5.1.5 根據(jù)對樣品污染狀況的估計,選擇2 個~3 個適宜稀釋度的樣品勻液(液體樣品可包括原液),在進行10 倍遞增稀釋的同時,每個稀釋度分別吸取1 mL 樣品勻液于2 個無菌平皿內(nèi)。同時分別取1 mL樣品稀釋液加入2 個無菌平皿作空白對照。
5.1.6 及時將15 mL~20 mL 冷卻至46 ℃的馬鈴薯-葡萄糖-瓊脂或孟加拉紅培養(yǎng)基(可放置于46℃±1℃恒溫水浴箱中保溫)傾注平皿,并轉(zhuǎn)動平皿使其混合均勻。
5.2 待培養(yǎng)待瓊脂凝固后,將平板倒置,28℃±1℃培養(yǎng)5d,觀察并記錄。
5.3 菌落計數(shù)
肉眼觀察,必要時可用放大鏡,記錄各稀釋倍數(shù)和相應的霉菌和酵母數(shù)。以菌落形成單位(colonyforming units,CFU)表示。
選取菌落數(shù)在10 CFU~150 CFU 的平板,根據(jù)菌落形態(tài)分別計數(shù)霉菌和酵母數(shù)。霉菌蔓延生長覆蓋整個平板的可記錄為多不可計。菌落數(shù)應采用兩個平板的平均數(shù)。
6 結(jié)果與報告
6.1 計算兩個平板菌落數(shù)的平均值,再將平均值乘以相應稀釋倍數(shù)計算。
6.1.2 若所有平板上菌落數(shù)均大于150 CFU,則對稀釋度*高的平板進行計數(shù),其他平板可記錄為多不可計,結(jié)果按平均菌落數(shù)乘以*高稀釋倍數(shù)計算。
6.1.3 若所有平板上菌落數(shù)均小于10 CFU,則應按稀釋度*低的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)計算。
6.1.4 若所有稀釋度平板均無菌落生長,則以小于1 乘以*低稀釋倍數(shù)計算;如為原液,則以小于1計數(shù)。
6.2 報告
6.2.1 菌落數(shù)在100 以內(nèi)時,按“四舍五入”原則修約,采用兩位有效數(shù)字報告。
6.2.2 菌落數(shù)大于或等于100 時,前3 位數(shù)字采用“四舍五入”原則修約后,取前2 位數(shù)字,后面用0 代替位數(shù)來表示結(jié)果;也可用10 的指數(shù)形式來表示,此時也按“四舍五入”原則修約,采用兩位有效數(shù)字。
6.2.3 稱重取樣以CFU/g 為單位報告,體積取樣以CFU/mL 為單位報告,報告或分別報告霉菌和/或酵母數(shù)。

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