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志賀氏菌檢驗技術

 

    志 賀 菌 的 病 原 學 與 實 驗 室
 
                       診    斷

前  言
        志賀菌的細菌又稱痢疾桿菌，是腸桿菌中的一群*常見的引起細菌性痢疾的病原菌，對嬰幼兒可引起急性中毒性菌痢，死亡率高。
        菌痢一年四季均可發病,  但有明顯的季節性，以夏秋季發病率*高, 在我國福氏和宋內氏痢疾桿菌引起的痢疾較為常見。在新疆甲、乙類傳染病報告中發病率占居首位。

                 一、病 原 學
 生物學特性：
            形態與染色
             培養特性
            生化特性
             抗原特性
            致病性
            抵抗力

 1、 形態與染色    
    本菌為革蘭氏陰性桿菌，菌
體短小約為2 ～ 3×0.5 ～0.7um、
無鞭毛、不產生芽胞、無莢膜、
無動力、某些菌型有菌毛，易附
著在腸黏膜上皮細胞上。

2、培養特性：    本屬細菌為需氧或兼性***，*適
生長溫度為37℃，*適PH值為7.2～7.4，
營養要求不高，在普通培養基均可生長。
在液體培養基中呈均勻混濁生長，不形成
菌膜及沉淀。在麥康凱瓊脂、伊紅美藍瓊
脂、SS瓊脂上生長良好，經35～37℃培養
18～24h，可形成直徑為2mm，圓形稍凸起、
無色透明或半透明、光滑邊緣整齊的菌落。
但宋內氏痢疾桿菌容易形成粗糙型菌落，
菌落較大，邊緣不整齊。

3、生化特性
 表1     志賀氏菌屬的生化反應
實驗項目                                                                 反  應                                                                + ％
葡萄糖產酸                                                                 +                                                                 100.0
葡萄糖產氣                                 -                                                                  12.1
乳糖                                       -                                                                     0.3
蔗糖                                                                              -                                                                      0.9
甘露醇                                                                        +/ -                                                                 80.5
衛予醇                                                                        -/+                                 5.4 
水楊苷                                                                          -                                   0
H2S                                                                               -                                   0
尿素酶                                                                          -                                   0
丙二酸鹽                                                                      -                                   0
靛基質                                                                          d                                                                   37.8
甲基紅                                                                          +                                                                  100.0 
VP                                                                                 -                                   0
構櫞酸鹽                                                                      -                                   0
葡糖糖酸鹽                                                                  -                                   0
明膠酶                                                                          -                                   0
苯丙氨酸脫氨酶                             -                                   0 
賴氨酸脫氨酶                                                              -                                   0    
鳥氨酸酶                                                                    -/+                                20.0
精氨酸雙水解酶                                                        -/+                                 7.6

4、抗原特性:
    志賀菌的抗原結構是由菌體（O）
抗原，表面（K）抗原和菌毛抗原組
成，志賀菌沒有鞭毛,故沒有H抗（K）
抗原不耐熱,加熱100℃1h即可破壞。
菌體抗原為多糖復合物,具有特異性。
它分為兩種：      型特異性抗原
                              群特異性抗原

             表2:  各群血清型分布表                            
                                                            
                                                   血清型
    A群      痢疾志賀菌  12 
    B群     福氏志賀菌        16 
    C 群     鮑氏志賀菌  18 
    D群            宋內 志賀菌               1           

5、致病性：
   痢疾桿菌有強烈的內**、痢疾桿
菌還能產生外**引起神經麻痹現象。
當痢疾桿菌隨食物進入小腸內,在結腸
和直腸粘膜上大量繁殖,釋放**,使
腸粘膜充血、水腫、壞死形成潰瘍出
現膿血便、腹瀉、**里急后重和全
身中毒癥狀。

6、抵抗力
    志賀菌在外界抵抗力較弱
    冰塊中可生存數月，
    在10～37℃的水中可以生存數天，
在水果、蔬菜及病人接觸過的物品上
能存活數周。
    本菌對一般化學**劑均敏感。

      二．實驗室診斷

實驗室診斷包括：樣品的處理
                檢驗方法
                生化試驗                          
                血清學試驗

挑選菌落：
    選擇菌落時、應挑選中等大小、
圓形、光滑、無色透明、不發酵乳糖
的菌落。挑選菌落時應在每個平板上
挑取2～5個單個菌落穿種三糖鐵尿素
半固體培養基，37℃培養后觀察結果，
一般培養18h為*佳。
志賀菌在三糖培養基上的生化反應（見表4）

三、血清學鑒定
    首先用志賀氏四種多價血清（A1、
A2、F、宋內）進行玻凝。
    四種多價不凝集時，則考慮用鮑氏
多價血清(C1-5、C6-10、C11-14、C15-
18)逐一做玻凝。
   如不凝集，可再選志賀氏多價血清：
(A1-4、A5-8、A9-12),如以上血清均不
凝集，即可排除志賀氏菌。

福氏痢疾桿菌抗原結構表（表5）
菌  型                           抗 原 型                     群  抗  原
   1a   Ⅰ                   3、4   
   1b   Ⅰ                            3、4、6  
   1c   Ⅰ                            7  
   2a   Ⅱ       3、4
   2b   Ⅱ      7 
   3a   Ⅲ                   6、7
   3b                              Ⅲ                            3、4、6  
   3c   Ⅲ                            6   
   4a   Ⅳ                          （3、4） 
   4b   Ⅳ                            6
   4c   Ⅳ                            3、4、6、7  
   5a   Ⅴ                            4   
   5b   Ⅴ                            7   
   6*   Ⅵ                           （3、4） 
   X                 —                            7
   Y                 —                            3、4      

福氏志賀菌的血清鑒定（表6）

報告結果：
    凡鏡檢為G-桿菌
    符合志賀氏菌的生化反應
    血清凝集陽性者、即可判定菌
型并出據報告。
    對可疑菌株應上送上級部門進
行確認。
    對確診菌株接種半固體培養基
內保存。保存期限至少為3個月。

鑒別診斷：
    下述培養物可以棄去。
    1、在選擇性瓊脂平板上呈蔓延生
長的培養物。
    2、在18～24h內發酵乳糖，蔗糖
的培養物。
    3、三糖反應不符合的培養物。
 

說明及注意事項：
    三糖鐵尿素半固體為三糖鐵瓊脂
與尿素半固體兩者合并的復合培養物，
可以同時測定葡萄糖、乳糖、蔗糖的
發酵、產酸、產氣情況，并觀察H2S
的生成，尿素分解和動力；斜面上的
菌苔可做玻片凝集試驗。
    三糖鐵尿素半固體培養基用于腸
道菌的鑒別，效果良好。

   由于分解葡萄糖后產酸使PH降低，
中層及斜面變黃。同時又因為細菌利
用蛋白胨后產生的代謝物，在斜面微
氧環境下產堿使斜面變紅，而中層保
持厭氧狀態，不易氧化及揮發。仍為
黃色。

   尿素加熱過高，過久可使尿素酶
分解變紅；如加熱不足又可造成**
不徹底。因此關鍵問題是準確控制滅
菌溫度及其加熱時間。
 

        克氏鐵瓊脂與三糖鐵瓊脂的主
要區別在于后者加蔗糖可以排除一
些發酵蔗糖的非致病性腸道桿菌科
細菌，兩者主要用于初步鑒別腸桿
菌科的細菌。

    復習題：

1、志賀菌屬分幾個群，各群有多少個血清型？

2、志賀菌屬在三糖鐵尿素半固體瓊脂斜面上的生化反應是什么？

3、志賀菌四種多價血清指哪幾種？

謝謝！